如何用Feyond-F100熒光酶標儀進行重組C因子內(nèi)毒素檢測

細菌內(nèi)毒素是一類由細菌產(chǎn)生的體內(nèi)毒素，通常存在于細菌外膜中的脂多糖中。當細菌死亡或細菌墻受損時，這些脂多糖會被釋放到周圍環(huán)境中，而且具有非常強的毒性。在人體內(nèi)，血液循環(huán)系統(tǒng)將其傳輸?shù)礁鱾€器官和組織中，從而導(dǎo)致免疫系統(tǒng)產(chǎn)生過度炎癥反應(yīng)和細胞凋亡、壞死等病理變化。內(nèi)毒素普遍存在且不易滅活，在制藥和醫(yī)療器械行業(yè)中，靈敏可靠的內(nèi)毒素分析技術(shù)是非常必須的。

2024-09-12 09:28:07南京辰雨凡麗商貿(mào)有限公司48

鱟試劑廣泛用于檢測醫(yī)藥產(chǎn)品中的細菌內(nèi)毒素，但由于鱟資源稀缺，制約了鱟試劑的生產(chǎn)。重組C因子（Recombinant Factor C，rFC）作為鱟試劑的替代品，通過基因重組表達獲得，與內(nèi)毒素結(jié)合后被激活的重組C因子能切割底物獲得游離的熒光基團，熒光基團的釋放和內(nèi)毒素的濃度成正比。因此，可根據(jù)熒光強弱來定量測定內(nèi)毒素含量。

奧盛Feyond-F100熒光酶標儀針對重組C因子內(nèi)毒素?zé)晒鈾z測應(yīng)用，定制化軟件分析方法，實現(xiàn)標曲擬合、樣品濃度定量及回收率的計算，從而達到實驗操作與結(jié)果輸出的一體化。

圖1 傳統(tǒng)鱟試劑（左）與rFC（右）檢測內(nèi)毒素的原理比較

實驗材料

試劑盒名稱：Rhinogen?重組C因子內(nèi)毒素檢測試劑盒（貨號：RAF-01/02）

儀器：奧盛 Feyond-F100熒光酶標儀

實驗方法

加樣完成后，分別讀取0h與37℃孵育1h后的熒光檢測值，用陰性對照的熒光差值（ΔRFU）對標準品熒光讀數(shù)差值（ΔRFU）進行校準得到凈熒光差值。凈熒光差值的對數(shù)與內(nèi)毒素濃度的對數(shù)呈比例，且在0.005 至5.0 EU/mL 范圍內(nèi)呈線性。

圖2 Rhinogen^?重組C因子內(nèi)毒素檢測試劑盒的操作流程圖

熒光酶標儀參數(shù)設(shè)置

表1 酶標儀檢測參數(shù)

檢測模式	熒光
檢測類型	C因子
檢測波長	EX/EM: 380/440 nm
PMT增益	自動增益
積分時間	40 μs

定制重組C因子軟件界面

標準品與樣品布局及參數(shù)界面

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實驗結(jié)果

Feyond-F100熒光酶標儀滿足Rhinogen?重組C因子內(nèi)毒素測定試劑盒的測試要求，軟件可自動擬合出凈熒光差值（log值）和濃度（log值）的標準曲線，采用四個梯度的內(nèi)毒素稀釋液(濃度從0.005 EU/mL到5 EU/mL)進行檢測，R²值為 0.99977，標準曲線在這一擴展的濃度范圍內(nèi)顯示出良好的線性。

標準曲線及樣品濃度顯示界面